Переливание крови и кровезаменителей в хирургии и педиатрии: Учебное пособие. стр.13
5) эритроциты, взятые из гемоконтейнеров, на ACD, CPD, CPDA и SAG-Mannitol-консервантах, могут использоваться до истечения срока годности, указанного на упаковке гемоконтей-нера при условии его хранения при температуре 2-8 °С.
6) при использовании эритроцитов, взятых из сегментов гемоконтейнеров, рекомендуется отмыть их физраствором до приготовления суспензии.
Приготовление суспензии эритроцитов для исследования: Приготовьте 1% эритроцитную суспензию с раствором Bromelin Diana (10 мкл исследуемых эритроцитов добавьте в 1 мл раствора). Смешайте. Инкубируйте 10 мин при комнатной температуре (максимум 30 мин).
Необходимое дополнительное оборудование:
- автоматические дозаторы на 10, 25, 40, 50 мкл и 1 мл;
- сменные наконечники;
- шейкер микроплат;
- центрифуга DianaFuge;
- стандартные эритроциты Diana AI/В;
- раствор Bromelin Diana',
- физраствор;
- секундомер.
Техника проведения исследования:
Температура образцов исследуемой крови и реагентов должна быть комнатной.
1. Идентифицируйте (пронумеруйте) каждый образец на микроплате или ряд лунок.
2. Добавьте 40 мкл 1% суспензии обработанных бромелином исследуемых эритроцитов в соответствующие лунки микроплаты.
3. Добавьте 50 мкл исследуемой сыворотки или плазмы в лунки AI и В, а затем добавьте в них же 25 мкл суспензии стандартных эритроцитов Serigrup AI/B.
4. Восстановите лиофилизированные в лунках сыворотки и смешайте их с исследуемым материалом шейкированием на шейкере в течение 5 мин, на средней скорости.
5. Инкубируйте микроплату в течение 5 мин при комнатной температуре.
6. Центрифугируйте в центрифуге DianaFuge.
7. Встряхните микроплату на шейкере 1-2 минуты на средней скорости (до гомогенизации суспензии в лунке отрицательного контроля).
8. Встряхните 1-2 минуты на шейкере на самой медленной скорости для концентрирования агглютинации эритроцитов.
9. Считайте результаты реакции в течение последующих 3 мин и впишите их в прилагаемую таблицу интерпретации результатов, если не используется автоматический ридер.
Оценка результата (табл. 1):
Таблица 1
Результат определения группы крови и резус-принадлежности перекрестной реакцией моноклональными реагентами на микроплатах
|
Исследуемые группы крови |
Перекрестная |
|||||||
|
реакция |
||||||||
|
Груп- |
Анти- |
Анти- |
Анти- |
Анти- |
Анти- |
кон- |
А1 |
В |
|
па |
А |
В |
АВ |
троль |
||||
|
О |
— |
— |
— |
— |
+ |
+ |
||
|
А |
+ |
— |
+ |
— |
— |
+ |
||
|
В |
_ |
+ |
+ |
— |
+ |
— |
||
|
АВ |
+ |
+ |
+ |
— |
— |
— |
||
|
Ші (+) |
+ |
+ |
— |
|||||
|
КЬ(-) |
— |
— |
— |
|||||
Примечания: Агглютинация есть — положительный результат (+); нет агглютинации — отрицательный результат (-).
Внимание:
1. Результат реакции в контрольной микропробирке должен быть всегда отрицательным для правильной интерпретации реакции. Если он положительный, то необходимо отмыть вновь исследуемые эритроциты в физрастворе и приготовить новую эритроцитарную суспензию из них. Если контроль отрицательный, результаты реакции могут быть правильно интерпретированы.